产品货号:
BTN60205
中文名称:
柱式质粒DNA小提试剂盒(1~4mL)
英文名称:
Plasmid DNA Mini Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒用于质粒DNA小量制备与纯化。基于改良后的碱变性法,用碱使基因组DNA和质粒DNA均变性,再用酸中和,质粒DNA可以快速复性,而基因组DNA不能快速复性,故可以通过离心去除。除去基因组DNA后的含质粒DNA的上清用离心吸附柱吸附质粒DNA,洗去杂质,即可得到纯化的质粒DNA。
- 快速、步骤少,整个操作在30分钟左右完成。
- 不需要预平衡离心吸附柱。
- 通用洗柱液即开即用,不需要用户额外加乙醇。
- 溶液B中有蓝色染料,便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况,保证实验效果。
- 产量高,一次可以处理1~4mL过夜培养的G+菌液,每毫升过夜培养的细菌可以提取到2~5μg/mL(取决于质粒是高拷贝、中拷贝还是低拷贝)。
- 纯度高,采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8~2.0之间,可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
组分 | 规格 |
质粒DNA纯化溶液A | 13mL |
质粒DNA纯化溶液B | 13mL |
质粒DNA纯化溶液C | 18mL |
RNase A溶液(10mg/mL) | 0.6mL |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50mL |
DNA洗脱液 | 10mL |
保存:-20℃,其中RNase A溶液需置于-20℃,有效期1年。
- 从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中,37℃震荡培养12~16小时(摇床转速200~300)。
- 建议使用LB培养基,营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高,超过本系统的处理能力而降低质粒的质量。
- 延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
- 建议使用LB培养基,营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高,超过本系统的处理能力而降低质粒的质量。
- 用1.5mL离心管收集1~4mL过夜培养饱和菌液,室温12000rpm离心1分钟,弃上清,再短暂离心,吸弃残留液体。
- 第一次使用本试剂盒时,先将本试剂盒提供的全部RNase A溶液加入到质粒DNA纯化溶液A(简称溶液A,下同)中,摇匀后再取用,未用完的溶液A放4℃保存。
- 加入250μL溶液A到第2步得到的细菌沉淀中,用枪头充分吹打使菌体重悬。
- 细胞未充分悬浮会影响后续碱变性,可以使用漩涡振荡器混匀或使用枪头吸头吹打沉淀至完全混匀。
- 加入250μL质粒DNA纯化溶液B(下面简称溶液B,如果溶液B在低温放置产生沉淀,须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和颠倒4~6次混匀,蓝色将变得均匀并且溶液将变得粘稠。
- 千万不要剧烈振荡,否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。
- 冰上放置不超过5分钟。
- 冰上放置不要超过5分钟,否则质粒DNA会有碱损伤。
- 溶液B用后需拧紧盖子存放,否则空气中的二氧化碳会进入溶液,形成碳酸,中和其中的碱,降低其效率。
- 如果溶液B颜色不是蓝色,则表示变质,应该弃之不用并且跟厂家联系。
- 冰上放置不要超过5分钟,否则质粒DNA会有碱损伤。
- 加入350μL冰上预冷的质粒DNA纯化溶液C(下面简称溶液C),温和反复颠倒4~6次,溶液将变成无色,将有白色絮状沉淀产生。
- 冰上放置至少5分钟让质粒DNA复性。不能短于5分钟,一般10分钟。
- 12000rpm离心3分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,部分絮状物悬浮在上清液中属正常现象,吸取上清时避开这些悬浮物即可。如果此步的离心在4℃进行,可减轻沉淀物漂浮。
- 静置2分钟以让质粒DNA与离心吸附柱充分结合。
- 室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中的废液。
- 加入500μL的通用洗柱液到离心吸附柱中,室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中废液。
- 通用洗柱液中含乙醇,每次用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。
- 重复上步1次。
- 室温12000rpm离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如残留乙醇使DNA溶液在电泳上样时不能沉淀到加样孔中)。
- 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入30~100μL 65~80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。
- 室温12000rpm离心1分钟,离心管底溶液即质粒DNA溶液。
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